1. Bruk online-filtre
In-line-filteret plasseres mellom autosampleren og den kromatografiske kolonnen (eller vaktkolonnen). Vanlige in-line-filtre er delt inn i rustfrie in-line-filtre med utskiftbar fritte (0.5 μm eller 0.2 μm) og engangs-PEEK. For nettfiltre laget av forskjellige materialer, må vanligvis en siktplate med mindre åpning enn kolonnefritteplaten velges, for å effektivt fange opp partiklene som kan blokkere den kromatografiske kolonnefritteplaten. Når det oppdages at trykket på instrumentet begynner å øke, er det mulig at in-line filterfritten begynner å tette seg, og vi må oppdatere den før den blir helt tilstoppet.
In-line filtre fungerer akkurat som membraner, men krever ikke noe ekstra arbeid. Etter sentrifugering av prøven er det fortsatt mulig at en liten mengde partikler kommer inn i instrumentet, og de gjenværende partiklene kan fanges opp av in-line-filteret som er plassert foran den kromatografiske kolonnen. I tillegg er fordelen med nettfilteret at det er enkelt og greit å bytte. Vanligvis tar det bare 5 minutter å erstatte den, og den kan startes på nytt for bruk, og den trenger ikke bruke tid på å justere eller kalibrere. En annen fordel er at in-line-filteret også kan filtrere ut partiklene som genereres av aldrende slitasje på enkelte deler i instrumentet. Jeg anbefaler sterkt at hvert væskefaseinstrument er utstyrt med et in-line filter. Selv om det brukes en vaktsøyle, anbefaler jeg også å installere et in-line filter før vaktsøylen.
2. Bruk vaktsøyle
En vaktkolonne er en kort kromatografisk kolonne installert foran den kromatografiske kolonnen. Den er vanligvis 1-2 cm lang, og pakkingen er tilpasset pakkingen til kolonnen som brukes, og porestørrelsen til fritten som brukes er ikke større enn den til fritten som brukes i kolonnen. Vaktsøylen har to funksjoner: (1) den kan blokkere partiklene som kan blokkere søylen; (2) fordi vaktkolonnen og kolonnepakningen er tilpasset, vil alle kjemiske urenheter som kan irreversibelt interagere med kolonnepakningen uten topping fanges opp først av vaktkolonnen.
Å bruke en vaktsøyle kan definitivt forlenge levetiden til kolonnen. Før du vurderer om du skal bruke en vaktsøyle, anbefales det imidlertid å vurdere følgende punkter:
(1) Beskyttelsessøylen er ikke billig, så vurder om kostnadene ved å kjøpe vaktsøylen kan kompenseres av den økte levetiden for kolonnen;
(2) Hvor lang er levetiden til vaktsøylen? Det er nødvendig å ta hensyn til når beskyttelseskassetten må skiftes, for ikke å forurense den kromatografiske kolonnen fordi utskiftingen er for sent;
(3) Hvordan skylle vaktsøylen? Ved spyling må vaktkolonnen og den kromatografiske kolonnen vaskes separat for å unngå å skylle urenhetene som er akkumulert i vaktkolonnen inn i den kromatografiske kolonnen;
(4) Ikke forvent å øke kolonneeffektiviteten på grunn av tillegg av en 1-2 cm beskyttelsessøyle. Selv om installasjon av en beskyttelsessøyle ligner på å øke søylelengden, legger bruken av en beskyttelsessøyle også til to koblinger og tilkoblingsrør, noe som vil redusere kolonneeffektiviteten til instrumentsystemet, så det ville være bra om kolonneeffektiviteten uten en vakt kolonne kunne opprettholdes.
Unødvendig å si at bruk av beskyttelsessøyler sikkert kan forlenge kolonnens levetid, men det anbefales at hvert laboratorium vurderer behovet for beskyttelsessøyler med tanke på økonomi og innsats. Selv med en beskyttelsessøyle, vil jeg anbefale å sette et in-line filter mellom beskyttelsessøylen og autosampleren, utskifting av in-line filteret er tross alt billigere enn å bytte beskyttelsessøylen og øker levetiden til både beskyttelsessøylen og kolonnen .
3. Ikke legg inn ubehandlede prøver
Med eller uten forbehandling anbefales det at alle prøver filtreres eller sentrifugeres før injeksjon. For eksempel, når prøven filtreres gjennom en filtermembran for å fjerne partikler og derved redusere tilstoppingen av fritten til den kromatografiske kolonnen, må porestørrelsen til filtermembranen være mindre enn porestørrelsen til fritten til den kromatografiske kolonnen. Generelt bruker kromatografiske kolonner med partikler større enn 3 μm 2 μm fritte, kromatografiske kolonner med 3 μm partikler bruker 0.5 μm fritte, og kolonner med partikler mindre enn 3 μm bruker vanligvis 0.2 μm frit, så de generelle 0.45 μm-filtrene kan i utgangspunktet brukes i alle kromatografiske kolonner bortsett fra sub-2 μm-partikler; for kolonner med sub-2 μm partikler, brukes vanligvis filtre med 0.2 μm porer. De fleste filtermembraner er ferdigpakket og kan kobles direkte til en sprøyte for filtrering eller brukes som en filterplate i en 96-brønnplate.